9번
발문
전반사 형광 현미경(TIRF; Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy)의 설명이다. 옳은 것은? (E, 2점)
선지
① 살아있는 세포의 내부를 관찰하기 위해 고안된 방법이다. ② 비교적 두꺼운 cover glass를 이용해야 좋은 결과를 얻을 수 있다. ③ 막 지역의 여러 tagging된 단백질을 관찰하기 위해 고안된 방법이다. ④ 신호대비 노이즈 비가 매우 높은 선명한 이미지 생성이 가능하다. ⑤ 감쇠장에 의해 형성된 소멸파는 낮은 에너지로 샘플 안쪽까지 도달 가능하다.
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해설
정답: ④
TIRF 현미경의 원리:
빛이 유리(고굴절률)에서 세포막(저굴절률)으로 **전반사(total internal reflection)**되는 임계각 이상에서 조사되면, 경계면에서 **소멸파(evanescent wave)**가 생성된다. 이 소멸파는 경계면으로부터 ~100–200 nm 이내의 매우 얇은 영역에서만 형광을 들뜨게 할 수 있다.
- ①: 세포 내부가 아닌 **세포막 인근 영역(plasma membrane 근처)**을 관찰 ✗
- ②: 두꺼운 cover glass는 오히려 불리 ✗
- ③: 막 지역 단백질 관찰은 맞지만, “여러 tagging된 단백질”보다는 세포막 근처의 단일 분자 이벤트 관찰이 주목적 ✗
- ④: 배경 형광이 극히 낮아 매우 높은 signal-to-noise ratio를 달성, 단일 분자 수준 관찰도 가능 ✓
- ⑤: 소멸파는 ~100–200 nm 깊이까지만 도달, 안쪽까지 도달하지 못함 ✗