3번
발문
형광현미경 이미지를 얻기 위해 다양한 primary antibody와 secondary antibody를 이용해 실험했으나 정확한 결과를 얻지 못했다. 아래 실험 내용을 보고 잘못된 부분을 찾으시오. (I, 2점)
Mitosis 동안 spindle microtubule, DNA와 centromere를 관찰하기 위해 rabbit antibody directed against spindle microtubule과 rabbit antibody directed against centromere와 **DAPI (DNA 염색약)**를 이용하여 염색한 후 서로 다른 형광이 달린 secondary antibody를 사용해 염색 후 현미경으로 관찰하였으나 결과를 얻지 못했다.
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해설
잘못된 점: Primary antibody가 두 개 모두 rabbit에서 만들어진 항체이다.
Secondary antibody는 primary antibody의 **숙주 종(host species)**을 인식한다. 두 primary antibody가 모두 rabbit 유래이면, secondary antibody가 두 primary antibody를 구별하지 못하므로 spindle microtubule과 centromere를 따로 채색하는 것이 불가능해진다.
올바른 실험 설계:
- Spindle microtubule: rabbit antibody → anti-rabbit secondary (형광 A)
- Centromere: mouse antibody (다른 종 사용) → anti-mouse secondary (형광 B)
- DNA: DAPI (직접 염색, antibody 불필요)
이와 같이 서로 다른 종의 primary antibody를 사용해야 서로 다른 secondary antibody로 각각을 구별할 수 있다.