13번
발문
Confocal 현미경을 이용해 250 μm 깊이의 조직 안쪽을 관찰하려고 했으나 선명한 이미지를 얻는데 실패하였다. 그 원인을 바르게 설명한 것은? (3점)
선지
① 방출되는 빛이 더 긴 파장을 가질 수 있게 조절해야 된다. ② 더 강한 빛을 사용하여 더 강하게 형광을 들뜨게 해야 한다. ③ Image deconvolution을 이용해 이미지를 처리해야 한다. ④ 형광 물질을 들뜨게 하는 고에너지 빛이 깊은 곳으로 침투하지 못했다. ⑤ 형광이 들뜬 후 방출되는 에너지가 현미경의 detector에 도달하지 못했다.
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해설
정답: ④
250 μm는 공초점 현미경의 깊이 한계(~100 μm)를 넘는 깊이다.
- ①: 더 긴 파장은 에너지가 낮아 형광 들뜸에 불리 ✗
- ②: 더 강한 빛 → 광독성(phototoxicity) 및 광표백(photobleaching) 악화 ✗
- ③: Deconvolution은 이미 얻어진 이미지의 blur를 수학적으로 제거하는 방법 — 빛 자체가 깊이 도달하지 못하는 문제를 해결하지 못함 ✗
- ④: Confocal에서 사용하는 고에너지 단광자 빛(보통 가시광선)은 조직에서 산란·흡수 → 깊은 곳까지 침투 불가 → 형광 들뜸 자체가 안 됨. (이를 해결하려면 two-photon microscopy 사용 필요) ✓
- ⑤: 문제는 빛의 입사 과정(들뜸)의 문제이지 방출 신호의 detector 도달 문제가 아님 ✗